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食物ファージ力価の測定方法宿主細胞の過剰量の場合、プラークの数は、ファージの増加とともに直線的に増加する。

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出所:
2018/04/16 15:06
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食物ファージ力価の測定方法
 
過剰の宿主細胞の場合、プラークの数は、ファージの増加とともに直線的に増加する。この理由から、宿主細胞を希釈するのではなく、感染前にファージを希釈する。低いMOI(感染再現性)でのプラストングはまた、各プラークがただ1つのDNA配列を含むことを保証する。
 
材料および試薬
 
電子レンジ
 
2. LB / IPTG / Xgal培養板
 
3. lb培地
 
4.トップアガロースゲル
 
操作手順
 
1.単一のER2537クローンを5〜10mlのLB培地に接種し、インキュベートし、対数増殖期(OD600〜0.5)までインキュベートし、
 
2.細胞が成長している間、上部アガロースゲルをマイクロ波で滅菌培養管に分注します(チューブあたり3 ml)。使用のために45℃に維持する。
 
3. LB / IPTG / Xgalプレートを37℃で予熱して使用します。
 
4. LB培地でファージを10倍に希釈する。
 
推奨希釈範囲:増幅ファージ培養上清については108-1011;非増幅スクリーニング溶出物については101-104。各希釈液は新しいものに交換され、交差汚染を避けるためにエアロゾルバリアを使用することが最善です。
 
5. ER2537培養物を一旦対数期中期まで増殖させたら、チューブ当たり200mlの微量遠心チューブに分注する。
 
6.希釈したファージ上清を細菌培養液を含むマイクロ遠心チューブに加え、希釈液10 mlのみを微量遠心チューブに加え、急速にボルテックスし、室温で1〜5分間インキュベートする。
 
上層に7. 45℃アガロースゲルを含むチューブに移し、すぐに穏やかにプレートが均等に最上層のゴムを分散ロッキング、予熱したLB / IPTG / Xgalをプレートに注ぎ、素早くボルテックス。
 
8.プレートを5分間冷却し、37℃で一晩インキュベートする。
 
9.プレートへ約100被験者のプラークを計数したプラークの数は、プラークを10ミリリットル当たりのファージ力価を得るために希釈を乗じた - プラーク形成単位

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